Purification of protease Dried frui

Purification of protease Dried fruiting bodies of C. sobolifera mushrooms (25 g) were homogenized and extracted overnight in 0.15 M NaCl at 4°C. The homogenate was centrifuged at 8000×g for 20 min, and then (NH4)2SO4 was added to the supernatant to 70% saturation. Four hours later, the precipitate was collected by centrifugation at 6000×g for 30 min. The precipitate was dissolved and dialyzed to remove (NH4)2SO4 before loading onto an anion-exchange column (2.5×20 cm) of DEAE-cellulose pre-equilibrated with 10 mM NH4HCO3 buffer (pH 9.4). The column was eluted with the same buffer. After removal of the unadsorbed peak (fraction D1) containing strong protease activity, two adsorbed peaks, fractions D2 and D3 were eluted with 100 mM and 1 M NaCl, respectively, in the starting buffer. The active fraction (D1) was next subjected to a cation-exchange column (1.0×15 cm) of SP-

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การทำให้บริสุทธิ์ของน้ำย่อยแห้งดอกเห็ดเห็ดซี sobolifera (25 กรัม) มีหดหายและสกัดค้างคืนใน 0.15 M NaCl ที่ 4 องศาเซลเซียส homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 8000 ×กรัมเป็นเวลา 20 นาทีแล้ว (NH4) 2SO4 ถูกเพิ่มลงในสารละลายอิ่มตัวถึง 70% สี่ชั่วโมงต่อมาตะกอนที่ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 6000 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาที ตะกอนก็เลือนหายไปและ dialyzed จะลบ (NH4) 2SO4 ก่อนที่จะโหลดลงในคอลัมน์ไอออนแลกเปลี่ยน (2.5 × 20 เซนติเมตร) DEAE-เซลลูโลสก่อน equilibrated 10 มิลลิ NH4HCO3 บัฟเฟอร์ (pH 9.4) คอลัมน์นี้ถูกชะด้วยบัฟเฟอร์เดียวกัน หลังจากที่การกำจัดของยอด unadsorbed (ส่วน D1) ที่มีกิจกรรมโปรติเอสที่แข็งแกร่งสองดูดซับยอดเศษส่วน D2 และ D3 ถูกชะกับ 100 มิลลิเมตร 1 เมตรโซเดียมคลอไรด์ตามลำดับในบัฟเฟอร์เริ่มต้น